薏苡仁酯对人鼻咽癌细胞体外增殖的影响
作者：胡笑克，李毓，高敏，李典鸿，梁昌盛
单位：胡笑克，李毓，高敏，李典鸿，梁昌盛 中山医科大学核医学教研室(广州，510089)；李毓，高敏，李典鸿 广东省中医研究所
关键词：鼻咽癌细胞株；CNE2Z；薏苡仁酯；药物作用
癌症990631
中图分类号：R730.23 文献标识码：A
文章编号：1000-467X(1999)06-0730-01
薏苡仁配合放射治疗晚期鼻咽癌(NPC)已取得较好的近期和远期效果〔1〕。但单独使用薏苡仁能否抗NPC还值得深入研究。本文在既往研究的基础上，探讨薏苡仁的有效成分薏苡仁酯(CXL)对人NPC细胞增殖的影响及其可能的作用机理。
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1材料与方法
1.1材料
雄性NIH小鼠，本校实验动物中心提供。人NPC细胞株CNE2Z为低分化鳞状细胞癌(广东医学院建株)。CXL注射液(浙江康莱特药业股份有限公司提供，批号96181277)、3HTdR(中国科学院北京原子能研究所)、RPMI1640(Gibco)、顺铂(DDP，济南齐鲁制药厂)。
1.2方法
细胞的增殖能力检测采用3HTdR掺入法和活细胞(台盼蓝拒染)计数法。
测定量效曲线：取对数生长期CNE2Z细胞接种于96孔培养板内，常规培养(5%CO2、95%O2、饱和湿度)12h后，加入药物。设不加药对照组，DDP阳性对照组，CXL实验组。DDP及CXL剂量为10-7～10-4mol/L。加入药物后同条件下继续培养72h。终止反应前4h每孔加入3H-TdR0.5μCi。培养结束后用多头细胞收集器收集细胞，液闪测量其放射性计数(cpm)。计算抑制率，抑制率=[(1-实验组或阳性对照组cpm)/不加药对照组cpm]×100%。以抑制率对浓度作图，绘制量效曲线。
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测定CXL的时效关系方法同上，药物浓度取10-4mol/L，培养时间6～72h。药物作用达到规定的时间后，弃去原含药培养基，换用无药培养基，继续培养至72h。
测定CXL对细胞倍增时间的影响用活细胞计数法。t代表培养时间，N0及Nt分别表示接种和培养t小时后的活细胞数，测定药物对细胞倍增时间(TD)的影响。TD=0.301t/(logNt-logN0)〔2〕。
观察药物对骨髓的毒性作用：取3只小鼠右侧股骨常法制备骨髓有核细胞悬液。接种细胞数、培养条件及检测方法同前述(3H-TdR掺入法)。CXL和DDP浓度分别取10-4mol/L，作用72h，计算其对骨髓细胞生长的抑制率。
1.3结果分析与统计处理
采用推广的MichaelisMenten方程〔3〕分析药效动力学参数。显著性差别采用t检验。n代表实验次数。药物的相对效力(RP)在ID50水平求得。设两药物量效曲线直线化后的斜率平行(无统计学差别)，B药对于A药的RP=ID50A/ID50B。
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2结果
2.1药物对CNE-2Z增殖的影响
CXL和DDP(作用72h)均以量效方式抑制CNE-2Z增殖(图1)，ID50分别是10-4.906±10-5.619mol/L和10-5.531±10-6.268mol/L(
±s)，(n=6，下同)。CXL的RP是DDP的23.7±4.5%(两条量效曲线直线化后的斜率分别是：CXL0.968±0.204，DDP0.751±0.153；经检验t=0.851，P>0.5)。
图1 CXL对CNE2Z增殖的抑制作用
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时效关系研究显示，加CXL(10-4mol/L)后12h即见效，并随时间延长抑制作用加强，36h后曲线趋向平坦(图2)。
图2 CXL抑制CNE2Z增殖的时效关系
在本实验条件下，CNE2Z于接种后24h进入对数生长期，5天平台期。在对数生长期，CNE2Z的TD为27.5±5.1h，经CXL(10-4mol/L)处理后，TD延长至38.5±6.5h，增加40.0%±6.2%。
2.2药物对骨髓细胞的毒性作用
正常骨髓细胞经药物(10-4mol/L)作用72h，CXL组对其生长的抑制率为0.2±4.0%，DDP组87.3±10.6%。
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3讨论
CXL是从薏苡仁提取的一种有效成分，具有抗癌和免疫调节作用〔4〕。CXL能抑制宫颈癌细胞HeLa53、结肠癌细胞M7009的增殖，但对NPC细胞CNE2Z是否有同样作用尚未见报道。
在本实验条件下，CXL对CNE2Z的增殖呈浓度依赖性抑制。时效曲线显示10-4mol/LCXL对CNE-2Z增殖的抑制作用在加药后12h即见效，且随时间的延长而加强，但36h后抑制作用不再增强。由于细胞DNA合成(3H-TdR掺入)减少，故CNE-2Z的TD明显延长。虽然，CXL的相对效力只有DDP的23.7%，但无骨髓抑制，即使在高剂量(10-4mol/L)长时间(72h)作用下，正常骨髓细胞的生长也未受影响，而DDP则相反，对该细胞的损伤高达87.3%。说明CXL能选择性地抑制NPC肿瘤细胞CNE-2Z的增殖。
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基金项目：广东省自然科学基金(No.970839)资助项目
〔参考文献〕
〔1〕李毓.薏苡仁配合放射治疗晚期鼻咽癌的远期疗效分析〔J〕.华夏医学，1998，11(1)：10.
〔2〕徐端正.推广的MichaelisMenten方程在计量效应曲线上的应用〔J〕.上海医科大学学报，1990，17(1)：69.
〔3〕韩锐.抗癌药物研究与实验技术〔M〕.北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1997：282～283.
〔4〕阴健.中药现代研究与临床应用〔M〕.北京：中医古籍出版社，1995：388～392.
收稿日期：1999-02-24；修回日期：1999-06-11, http://www.100md.com
单位：胡笑克，李毓，高敏，李典鸿，梁昌盛 中山医科大学核医学教研室(广州，510089)；李毓，高敏，李典鸿 广东省中医研究所
关键词：鼻咽癌细胞株；CNE2Z；薏苡仁酯；药物作用
癌症990631
中图分类号：R730.23 文献标识码：A
文章编号：1000-467X(1999)06-0730-01
薏苡仁配合放射治疗晚期鼻咽癌(NPC)已取得较好的近期和远期效果〔1〕。但单独使用薏苡仁能否抗NPC还值得深入研究。本文在既往研究的基础上，探讨薏苡仁的有效成分薏苡仁酯(CXL)对人NPC细胞增殖的影响及其可能的作用机理。
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1材料与方法
1.1材料
雄性NIH小鼠，本校实验动物中心提供。人NPC细胞株CNE2Z为低分化鳞状细胞癌(广东医学院建株)。CXL注射液(浙江康莱特药业股份有限公司提供，批号96181277)、3HTdR(中国科学院北京原子能研究所)、RPMI1640(Gibco)、顺铂(DDP，济南齐鲁制药厂)。
1.2方法
细胞的增殖能力检测采用3HTdR掺入法和活细胞(台盼蓝拒染)计数法。
测定量效曲线：取对数生长期CNE2Z细胞接种于96孔培养板内，常规培养(5%CO2、95%O2、饱和湿度)12h后，加入药物。设不加药对照组，DDP阳性对照组，CXL实验组。DDP及CXL剂量为10-7～10-4mol/L。加入药物后同条件下继续培养72h。终止反应前4h每孔加入3H-TdR0.5μCi。培养结束后用多头细胞收集器收集细胞，液闪测量其放射性计数(cpm)。计算抑制率，抑制率=[(1-实验组或阳性对照组cpm)/不加药对照组cpm]×100%。以抑制率对浓度作图，绘制量效曲线。
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测定CXL的时效关系方法同上，药物浓度取10-4mol/L，培养时间6～72h。药物作用达到规定的时间后，弃去原含药培养基，换用无药培养基，继续培养至72h。
测定CXL对细胞倍增时间的影响用活细胞计数法。t代表培养时间，N0及Nt分别表示接种和培养t小时后的活细胞数，测定药物对细胞倍增时间(TD)的影响。TD=0.301t/(logNt-logN0)〔2〕。
观察药物对骨髓的毒性作用：取3只小鼠右侧股骨常法制备骨髓有核细胞悬液。接种细胞数、培养条件及检测方法同前述(3H-TdR掺入法)。CXL和DDP浓度分别取10-4mol/L，作用72h，计算其对骨髓细胞生长的抑制率。
1.3结果分析与统计处理
采用推广的MichaelisMenten方程〔3〕分析药效动力学参数。显著性差别采用t检验。n代表实验次数。药物的相对效力(RP)在ID50水平求得。设两药物量效曲线直线化后的斜率平行(无统计学差别)，B药对于A药的RP=ID50A/ID50B。
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2结果
2.1药物对CNE-2Z增殖的影响
CXL和DDP(作用72h)均以量效方式抑制CNE-2Z增殖(图1)，ID50分别是10-4.906±10-5.619mol/L和10-5.531±10-6.268mol/L(
±s)，(n=6，下同)。CXL的RP是DDP的23.7±4.5%(两条量效曲线直线化后的斜率分别是：CXL0.968±0.204，DDP0.751±0.153；经检验t=0.851，P>0.5)。图1 CXL对CNE2Z增殖的抑制作用
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时效关系研究显示，加CXL(10-4mol/L)后12h即见效，并随时间延长抑制作用加强，36h后曲线趋向平坦(图2)。
图2 CXL抑制CNE2Z增殖的时效关系
在本实验条件下，CNE2Z于接种后24h进入对数生长期，5天平台期。在对数生长期，CNE2Z的TD为27.5±5.1h，经CXL(10-4mol/L)处理后，TD延长至38.5±6.5h，增加40.0%±6.2%。
2.2药物对骨髓细胞的毒性作用
正常骨髓细胞经药物(10-4mol/L)作用72h，CXL组对其生长的抑制率为0.2±4.0%，DDP组87.3±10.6%。
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3讨论
CXL是从薏苡仁提取的一种有效成分，具有抗癌和免疫调节作用〔4〕。CXL能抑制宫颈癌细胞HeLa53、结肠癌细胞M7009的增殖，但对NPC细胞CNE2Z是否有同样作用尚未见报道。
在本实验条件下，CXL对CNE2Z的增殖呈浓度依赖性抑制。时效曲线显示10-4mol/LCXL对CNE-2Z增殖的抑制作用在加药后12h即见效，且随时间的延长而加强，但36h后抑制作用不再增强。由于细胞DNA合成(3H-TdR掺入)减少，故CNE-2Z的TD明显延长。虽然，CXL的相对效力只有DDP的23.7%，但无骨髓抑制，即使在高剂量(10-4mol/L)长时间(72h)作用下，正常骨髓细胞的生长也未受影响，而DDP则相反，对该细胞的损伤高达87.3%。说明CXL能选择性地抑制NPC肿瘤细胞CNE-2Z的增殖。
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基金项目：广东省自然科学基金(No.970839)资助项目
〔参考文献〕
〔1〕李毓.薏苡仁配合放射治疗晚期鼻咽癌的远期疗效分析〔J〕.华夏医学，1998，11(1)：10.
〔2〕徐端正.推广的MichaelisMenten方程在计量效应曲线上的应用〔J〕.上海医科大学学报，1990，17(1)：69.
〔3〕韩锐.抗癌药物研究与实验技术〔M〕.北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1997：282～283.
〔4〕阴健.中药现代研究与临床应用〔M〕.北京：中医古籍出版社，1995：388～392.
收稿日期：1999-02-24；修回日期：1999-06-11, http://www.100md.com